說到分子克隆或者載體構(gòu)建
天空飄來六個(gè)字:
“分→切→接→轉(zhuǎn)→篩→表”
誰(shuí)的DNA動(dòng)了~
簡(jiǎn)單來說，分子克隆是指將一個(gè)特定的DNA片段（基因）插入到一個(gè)工程載體（如質(zhì)粒，噬菌體或病毒）中，形成重組DNA分子，并通過轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)染或感染等方式將其導(dǎo)入宿主細(xì)胞并擴(kuò)大培養(yǎng)，從而在體外實(shí)現(xiàn)目標(biāo)DNA片段在宿主細(xì)胞（或無細(xì)胞復(fù)制體系）中的大量復(fù)制，用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。分子克隆作為現(xiàn)代生物技術(shù)領(lǐng)域的一項(xiàng)核心技術(shù)之一，自1970年代誕生以來，已經(jīng)極大地推動(dòng)了生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、農(nóng)業(yè)等多個(gè)科學(xué)領(lǐng)域的進(jìn)步。
分子克隆流程示意圖
PCR、酶切、連接、轉(zhuǎn)化是傳統(tǒng)基因克隆方法獲得重組質(zhì)粒必不可少的步驟。但經(jīng)典分子克隆存在操作繁瑣、耗時(shí)長(zhǎng)、復(fù)雜片段構(gòu)建難度大成功率低、酶切位點(diǎn)的選擇易受到限制等問題，費(fèi)時(shí)費(fèi)力。
為了解決這些問題，TIANGEN推出便捷、高效的分子克隆快速解決方案，搭配試劑和儀器，為科學(xué)工作者提供從制備模板-高保真擴(kuò)增-電泳-膠回收-載體構(gòu)建-轉(zhuǎn)化-篩選鑒定-質(zhì)粒提取-下游實(shí)驗(yàn)的完整解決方案，助你又快又好地完成克隆實(shí)驗(yàn)，GET理想的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
TIANGEN分子克隆快速解決方案
1.高保真擴(kuò)增
Ultra HiFidelity PCR KitⅡ（KP213）
模板普適性：能夠識(shí)別不同物種、30%～80% GC含量的DNA片段。
延伸力強(qiáng)：可擴(kuò)增長(zhǎng)至20 kb的DNA片段。
高靈敏度：基因組模板用量可低至1 ng。
操作簡(jiǎn)便：只需加入模板和引物，輕松配好體系，PCR產(chǎn)物平末端，純化后可直接用于無縫克隆。
2.凝膠回收
瓊脂糖凝膠DNA回收試劑盒 (增強(qiáng)型)（DP219）
——室溫溶膠，快速高效完成膠回收
本試劑盒采用可以高效、專一結(jié)合DNA的硅基質(zhì)材料和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)，從TAE或TBE瓊脂糖凝膠上回收DNA片段，同時(shí)除去蛋白質(zhì)、其它有機(jī)化合物、無機(jī)鹽離子及寡核苷酸引物等雜質(zhì)，回收100 bp-15 kb DNA片段，回收率高達(dá)80%，每個(gè)離心吸附柱每次可吸附的DNA量為10 μg。
快速：整個(gè)操作過程快速方便，十幾分鐘即可完成回收工作。
便捷：無需平衡液，室溫溶膠。
高效：獨(dú)特的離心柱和精心配制的緩沖液，保證*大量回收到高純度的目的DNA。
3.無縫克隆
EasyGeno單片段重組克隆試劑盒（VI202-02）
EasyGeno單片段重組克隆試劑盒基于DNA序列同源性進(jìn)行片段重組，可快速將單個(gè)片段定向克隆到任意線性化載體中。通過精心設(shè)計(jì)和嚴(yán)格試驗(yàn)，本試劑盒含有的2×EasyGeno Single Assembly Mix具有的酶活性可將載體和片段的同源區(qū)域從雙鏈的3’端進(jìn)行重組連接，*終得到的無缺口閉環(huán)質(zhì)?？芍苯愚D(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞篩選克隆。該方案克服了酶切位點(diǎn)的限制，僅需在插入片段PCR引物5’端引入線性化載體的末端序列，使得插入片段5’和3’兩端帶有載體兩端的一致性序列（15-25 bp），即可實(shí)現(xiàn)插入片段的定向重組進(jìn)入載體。重組反應(yīng)可在恒溫條件下快速進(jìn)行（50 ℃處理15 min），配合靈活的PCR產(chǎn)物處理方式和快速轉(zhuǎn)化方法，數(shù)小時(shí)內(nèi)即可完成從DNA樣品準(zhǔn)備到重組產(chǎn)物的轉(zhuǎn)化涂板培養(yǎng)的全部操作。
4.轉(zhuǎn)化培養(yǎng)
T-Fast感受態(tài)細(xì)胞（CB109）
——質(zhì)粒得率高、生長(zhǎng)速度快的感受態(tài)細(xì)胞
快速生長(zhǎng)：菌株生長(zhǎng)快速，涂布于瓊脂平板后 6 h 可見菌落， 8 h 可挑取單克隆菌落；過夜培養(yǎng)的單克隆菌落于 3 ml 液體LB培養(yǎng)基中培養(yǎng) 4h 即可用于質(zhì)粒提取。
快速轉(zhuǎn)化：適用于 Ampr 載體的 5 min 快速轉(zhuǎn)化流程。
高質(zhì)粒得率：相同 OD600 條件下，T-Fast 感受態(tài)細(xì)胞質(zhì)粒得率高于 DH5α 20%。
高陽(yáng)性率：攜帶lacIq 基因，可更嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目刂芁ac啟動(dòng)子的開啟，從而提高籃白斑篩選的陽(yáng)性率。
5.菌落PCR
2×Taq PCR預(yù)混試劑Ⅱ(KT211)
——高效高抗逆性的快速 PCR 預(yù)混液
高擴(kuò)增效率：高效擴(kuò)增不同大小（長(zhǎng)達(dá)5kb）、不同來源的DNA片段。
高靈敏度：可從低至 10 pg 的基因組模板中擴(kuò)增目的片段。
高抗逆性：對(duì)于粗提模板 / 菌液等雜質(zhì)含量高的模板也能輕松擴(kuò)增目的片段，試劑反復(fù)凍融多次不影響擴(kuò)增效果。
操作簡(jiǎn)便：只需加入模板和引物,輕松配好體系,特別適合大批量基因鑒定, PCR產(chǎn)物帶A,純化后可直接用T/A載體克
隆。
6.質(zhì)粒提取
快速質(zhì)粒小提試劑盒（DP105）
——先進(jìn)的堿裂解技術(shù)，8 min 獲得高質(zhì)量質(zhì)粒
快速：步驟少，操作簡(jiǎn)單，僅需 8 min。
高效：可提取菌體 85% 以上質(zhì)粒 DNA。
配備了獨(dú)特的 TIANRed 試劑，可以清晰辨明抽提過程中樣本的裂解程度，確保得到高效率、高純度的質(zhì)粒 DNA。
儀器設(shè)備
切膠儀
PCR儀
金屬浴
全自動(dòng)核酸提取儀
方案在手，實(shí)驗(yàn)無憂
分子克隆完整解決方案產(chǎn)品列表
